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即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒，可以對靶片段進行實時定量RT-PCR分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料DNAgreen等所有一管式實時定量RT-PCR所需要的成分，用戶只需加入RNA模板和引物即可進行實時定量RT-PCR反應，具有廣泛的用途。

一管式完成qRT-PCR反應，避免樣品交叉污染，尤其適合臨床應用。

即開即用，用戶不需要單獨準備qRT-PCR所需的各種試劑。

主要成分只有兩個（RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix），將加樣步驟減少到*，極大降低了加樣誤差，增加了可重復性。

使用范圍廣，適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。

高靈敏度，每個RT-PCR體系*可以檢測200拷貝的RNA分子，可擴增的模版RNA的最長達2000 nt。

即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒規(guī)格及成分

成  份

50次

塑料袋包裝

300次

塑料袋包裝

雙酶一管式qRT-PCR Buffer，2×

750 uL

4.5 mL

MMLV-Taq Mix

100 uL

600 uL

RNase-free水

1 mL

6 mL

即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒使用手冊

1份

1份

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存, 保存期限為一年。

自備試劑

RNA模板、引物。有的機型需要自備ROX。

使用方法

在一干凈的無RNase的PCR管中，先加入下列成分（下面只列出樣品管的設置情況，用戶可自己根據(jù)需要設置陽性和陰性對照）：

成分

樣品

自備RNA模板（分下面三種情況）

見下

總RNA

100-500 ng

或poly(A) mRNA

10-500 ng

或體外轉錄得到的專一RNA

0.01 pg-500ng

RNA特異性引物一（自備）

終濃度300nM（注1）

RNA特異性引物二（自備）

終濃度300nM

RNase-free水

補到10 uL

雙酶一管式qRT-PCR Buffer（2×）

15 uL

自備ROX（某些熒光PCR機型需要）

3 uL（注2）

MMLV-Taq Mix

2 uL

即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒注1：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度300nM進行實驗，根據(jù)實驗結果具體情況，在200～800nM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減RNase-free水用量，保證總反應體積不變即可。

注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三種型號的熒光PCR儀器，則需用自備的ROX進行Ct值校正。對ABI 7700和7900，ROX的*濃度為1×（即在每30 uL 反應體系中加3 uL 10×ROX）。對ABI 7500， ROX的*濃度為0.05-0.1×（每30 uL 反應體系加0.3 uL 10×ROX；也可將10×ROX稀釋到1×，然后每個反應體系加入3 uL 1×ROX）。ROX會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。對于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器，ROX不是必須的，但加入的話也不會影響整個PCR分析。

輕柔混合均勻后放入PCR儀中進行熒光定量RT-PCR。

設定RT-PCR反應條件時，一般將RT的條件設定成42℃ 30分鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進入PCR循環(huán)（PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm值和PCR產(chǎn)物長度由用戶自行決定注）、*72℃ 5分鐘。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結合DNA時，*吸收光譜在471nm，結合DNA時的*吸收光譜在500nm，*發(fā)射光譜在530nm。

即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒關聯(lián)產(chǎn)品

即用型熒光定量PCR試劑盒、PCR級綠如藍染料。