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MDCK[NBL-2]犬腎細(xì)胞完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

細(xì)胞生長：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣；多角形

細(xì)胞傳代：1:2-1:4傳代；每周2-3次

MDCK[NBL-2]犬腎細(xì)胞凍存步驟：我們實驗室是按1:3:6 配凍存液1份甘油3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時用什么培養(yǎng)基凍存時就用什么培養(yǎng)基):

⑴ 吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培養(yǎng)基中止消化，有的細(xì)胞是加血清中止

⑷ 離心收集細(xì)胞，不同細(xì)胞離心率不一樣（以上僅為貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞收集就用第四部）

⑸ 吸出離心管上清液，加1ML 的凍存液重懸細(xì)胞，移到凍存管，放4度半小時，-20 度兩小時，-70度過夜，再放液氮長期保存。

MDCK[NBL-2]犬腎細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟如下：

1 將培養(yǎng)基置于37℃回溫，回溫后將其用75%酒精擦拭，移入無菌操作臺內(nèi)；

2 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套之后，從液氮罐中取出細(xì)胞冷凍管。若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，放入37-40℃水浴中，并不時搖動，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，轉(zhuǎn)移到已加入10ml培養(yǎng)液的離心管內(nèi)；

3 在1,000 rpm下離心5～10分鐘，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，置 5% CO2溫箱靜置培養(yǎng)；

4 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高，及時傳代；否則，及時更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

MDCK[NBL-2]犬腎細(xì)胞復(fù)蘇注意事項如下：

A.復(fù)蘇細(xì)胞請一定要注意安全，尤其是來自客戶的細(xì)胞。在放入液氮容器之前就應(yīng)該檢查凍存管是否擰緊。取出復(fù)蘇時若有液氮進(jìn)入，請一定要擰松凍存管，排出液氮，防止溫度升高時爆炸。

B. 細(xì)胞復(fù)蘇時需使用指定培養(yǎng)液。絕大多數(shù)細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌氁跃徛壤凉u次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行實驗。

C. 細(xì)胞復(fù)蘇時可以暫時不使用抗生素（G418等），以利于細(xì)胞的恢復(fù)。

D.細(xì)胞復(fù)蘇前需檢查恒溫水浴鍋的溫度是否已經(jīng)適宜。

SNU-449 KL1031 人肝癌細(xì)胞,SNU-449細(xì)胞

SNU-398 KL1032 人肝癌細(xì)胞,SNU-398細(xì)胞

SMMC-7721 KL1033 人肝癌細(xì)胞,SMMC-7721細(xì)胞

SK-HEP-1 KL1034 人肝癌細(xì)胞,SK-HEP-1細(xì)胞

QGY-7703 KL1035 人肝癌細(xì)胞,QGY-7703細(xì)胞

QGy-7701 KL1036 人肝癌細(xì)胞,QGy-7701細(xì)胞

Li-7 KL1037 人肝癌細(xì)胞,Li-7細(xì)胞

Human SMMC-7721 KL1038 人肝癌細(xì)胞,Human SMMC-7721細(xì)胞

Human SK-HEP-1 KL1039 人肝癌細(xì)胞,Human SK-HEP-1細(xì)胞

HUH-7 KL1040 人肝癌細(xì)胞,HUH-7細(xì)胞

HHCC KL1041 人肝癌細(xì)胞,HHCC細(xì)胞

HepG-2 KL1042 人肝癌細(xì)胞,HepG-2細(xì)胞

HepG2.2.1.5 KL1043 人肝癌細(xì)胞,HepG2.2.1.5細(xì)胞

Hep3b KL1044 人肝癌細(xì)胞,Hep3b細(xì)胞

Hep3B2.1-7 KL1045 人肝癌細(xì)胞,Hep3B2.1-7細(xì)胞

Hep G2 KL1046 人肝癌細(xì)胞,Hep G2細(xì)胞

JRDC054 KL1047 人肝癌細(xì)胞,hep 3B細(xì)胞, hep 3B

Hep 3B2.1-7 KL1048 人肝癌細(xì)胞,Hep 3B2.1-7細(xì)胞

HCC-9724 KL1049 人肝癌細(xì)胞,HCC-9724細(xì)胞

H7402 KL1050 人肝癌細(xì)胞,H7402細(xì)胞

FL62891 KL1051 人肝癌細(xì)胞,FL62891細(xì)胞

Bel-7405 KL1052 人肝癌細(xì)胞,Bel-7405細(xì)胞

BEL-7402 KL1053 人肝癌細(xì)胞,BEL-7402細(xì)胞

97H-EGFP-puro KL1054 人肝癌細(xì)胞,97H-EGFP-puro細(xì)胞

9204 KL1055 人肝癌細(xì)胞,9204細(xì)胞

CRIC020 KL1056 人肝癌 QGY-Q3*細(xì)胞, QGY-Q3*

AMS2 KL1057 人干細(xì)胞因子單克隆抗體細(xì)胞株 AMS2細(xì)胞

BB7.2 KL1058 人分泌A2抗體B淋巴細(xì)胞,BB7.2細(xì)胞

NCI-H1650 KL1059 人肺支氣管癌細(xì)胞,NCI-H1650細(xì)胞

NCI-H2227 KL1060 人肺小細(xì)胞肺癌 NCI-H2227細(xì)胞

NCI-H596 KL1061 人肺腺鱗癌細(xì)胞,NCI-H596細(xì)胞

L78 KL1062 人肺腺鱗癌細(xì)胞,L78細(xì)胞

PG49 KL1063 人肺腺癌細(xì)胞系 PG49細(xì)胞

GLC-82-TK KL1064 人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞） GLC-82-TK細(xì)胞

Calu-3 KL1065 人肺腺癌細(xì)胞（胸膜滲出液）Calu-3細(xì)胞