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2012083MSC家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

細(xì)胞生長：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣；多角形

細(xì)胞傳代：1:2-1:4傳代；每周2-3次

2012083MSC家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凍存步驟：我們實驗室是按1:3:6 配凍存液1份甘油3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時用什么培養(yǎng)基凍存時就用什么培養(yǎng)基):

⑴ 吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培養(yǎng)基中止消化，有的細(xì)胞是加血清中止

⑷ 離心收集細(xì)胞，不同細(xì)胞離心率不一樣（以上僅為貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞收集就用第四部）

⑸ 吸出離心管上清液，加1ML 的凍存液重懸細(xì)胞，移到凍存管，放4度半小時，-20 度兩小時，-70度過夜，再放液氮長期保存。

2012083MSC家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟如下：

1 將培養(yǎng)基置于37℃回溫，回溫后將其用75%酒精擦拭，移入無菌操作臺內(nèi)；

2 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套之后，從液氮罐中取出細(xì)胞冷凍管。若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，放入37-40℃水浴中，并不時搖動，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，轉(zhuǎn)移到已加入10ml培養(yǎng)液的離心管內(nèi)；

3 在1,000 rpm下離心5～10分鐘，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，置 5% CO2溫箱靜置培養(yǎng)；

4 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高，及時傳代；否則，及時更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

2012083MSC家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇注意事項如下：

A.復(fù)蘇細(xì)胞請一定要注意安全，尤其是來自客戶的細(xì)胞。在放入液氮容器之前就應(yīng)該檢查凍存管是否擰緊。取出復(fù)蘇時若有液氮進(jìn)入，請一定要擰松凍存管，排出液氮，防止溫度升高時爆炸。

B. 細(xì)胞復(fù)蘇時需使用指定培養(yǎng)液。絕大多數(shù)細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌氁跃徛壤凉u次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行實驗。

C. 細(xì)胞復(fù)蘇時可以暫時不使用抗生素（G418等），以利于細(xì)胞的恢復(fù)。

D.細(xì)胞復(fù)蘇前需檢查恒溫水浴鍋的溫度是否已經(jīng)適宜。

KLC3945 重組蛋白A/G rProteinA/G

KLC3946 重組鏈霉親和素 rStreptavidin

KLC3947 重組人血清白蛋白 rHSA

KLC3951 內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 ECGS

KLC3952 平滑肌細(xì)胞生長因子 SMCGS

KLC3953 平滑肌細(xì)胞生長因子（不含血清） SMCGS-sf

KLC3954 周細(xì)胞生長因子 PGS

KLC3955 腦膜細(xì)胞生長因子 MenCGS

KLC3956 神經(jīng)前體細(xì)胞生長因子 NPrCGS

KLC3957 神經(jīng)元生長因子 NGS

KLC3958 神經(jīng)前體細(xì)胞分化生長因子 NPCDS

KLC3959 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長因子 OPCGS

KLC3960 少突膠質(zhì)細(xì)胞生長因子 OGS

KLC3961 少突膠質(zhì)前體分化生長因子 OPCDS

KLC3962 雪旺細(xì)胞生長因子 SCGS

KLC3963 星形細(xì)胞生長因子 AGS

KLC3964 星形細(xì)胞生長因子-動物 AGS-a

KLC3965 小膠質(zhì)細(xì)胞生長因子 MGS

KLC3966 巨噬細(xì)胞生長因子 MGS

KLC3967 角質(zhì)細(xì)胞生長因子 KGS

KLC3968 角質(zhì)細(xì)胞生長因子（不含 BPE) KGS-2

KLC3969 角質(zhì)細(xì)胞生長因子（不含動物成分） KGS-acf

KLC3970 黑色素細(xì)胞生長因子 MelGS

KLC3971 黑色素細(xì)胞生長因子（不含TPA) MelGS-2

KLC3972 成纖維細(xì)胞生長因子 FGS

KLC3973 成纖維細(xì)胞生長因子-sf FGS-sf

KLC3974 成纖維細(xì)胞生長因子（不含動物成分） FGS-acf

KLC3975 成纖維細(xì)胞生長因子-2 FGS-2

KLC3976 扁桃體上皮細(xì)胞生長因子 TEpiCGS