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MDBK(BVDV-free)牛腎細(xì)胞完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

細(xì)胞生長：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣；多角形

細(xì)胞傳代：1:2-1:4傳代；每周2-3次

MDBK(BVDV-free)牛腎細(xì)胞凍存步驟：我們實(shí)驗室是按1:3:6 配凍存液1份甘油3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時用什么培養(yǎng)基凍存時就用什么培養(yǎng)基):

⑴ 吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培養(yǎng)基中止消化，有的細(xì)胞是加血清中止

⑷ 離心收集細(xì)胞，不同細(xì)胞離心率不一樣（以上僅為貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞收集就用第四部）

⑸ 吸出離心管上清液，加1ML 的凍存液重懸細(xì)胞，移到凍存管，放4度半小時，-20 度兩小時，-70度過夜，再放液氮長期保存。

MDBK(BVDV-free)牛腎細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟如下：

1 將培養(yǎng)基置于37℃回溫，回溫后將其用75%酒精擦拭，移入無菌操作臺內(nèi)；

2 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套之后，從液氮罐中取出細(xì)胞冷凍管。若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，放入37-40℃水浴中，并不時搖動，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，轉(zhuǎn)移到已加入10ml培養(yǎng)液的離心管內(nèi)；

3 在1,000 rpm下離心5～10分鐘，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，置 5% CO2溫箱靜置培養(yǎng)；

4 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高，及時傳代；否則，及時更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

MDBK(BVDV-free)牛腎細(xì)胞復(fù)蘇注意事項如下：

A.復(fù)蘇細(xì)胞請一定要注意安全，尤其是來自客戶的細(xì)胞。在放入液氮容器之前就應(yīng)該檢查凍存管是否擰緊。取出復(fù)蘇時若有液氮進(jìn)入，請一定要擰松凍存管，排出液氮，防止溫度升高時爆炸。

B. 細(xì)胞復(fù)蘇時需使用指定培養(yǎng)液。絕大多數(shù)細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌氁跃徛壤凉u次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行實(shí)驗。

C. 細(xì)胞復(fù)蘇時可以暫時不使用抗生素（G418等），以利于細(xì)胞的恢復(fù)。

D.細(xì)胞復(fù)蘇前需檢查恒溫水浴鍋的溫度是否已經(jīng)適宜。

SW480-EGFP-puro KL0879 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞,SW480-EGFP-puro細(xì)胞

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CaCo2 KL0888 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞,CaCo2細(xì)胞

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RKO KL0893 人結(jié)腸癌細(xì)胞（低分化）RKO細(xì)胞

T84 KL0894 人結(jié)腸癌細(xì)胞,T84細(xì)胞

SW620 KL0895 人結(jié)腸癌細(xì)胞,SW620細(xì)胞

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SW480 KL0897 人結(jié)腸癌細(xì)胞,SW480細(xì)胞

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