亚洲AV无码精品蜜桃,无码精品A∨在线观看中文,亚洲无AV在线中文字幕,强奸乱伦影音先锋

HMC1細胞/人肥大細胞HMC-1

種屬	人
別稱	HMC1
組織來源	癌細胞系
疾病	肥大細胞白血病
傳代比例/細胞消化	1:2傳代
完全培養基配置	IMDM培養基 ；10%胎牛血清 ；1%雙抗
形態	淋巴細胞樣
生長特征	懸浮生長
STR	Amelogenin X CSF1PO 10,13 D2S1338 17,25 D3S1358 15 D5S818 12,13 D7S820 10,11 D8S1179 12 D13S317 10,11 D16S539 10,12 D18S51 14,20 D19S433 14 D21S11 29 FGA 18,20 Penta D 11 Penta E 9,19 TH01 7,9.3 TPOX 8,11 vWA 17,19
倍增時間	每周 2-3次
培養條件	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
凍存條件	凍存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序凍存液
備注	該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液，請勿直接倒掉細胞培養液。
產品使用	于科學研究，不可作為動物或人類疾病的 產品使用。

HMC1細胞/人肥大細胞HMC-1

來源于一名 52 歲男性肥大細胞白血病患者的外周血樣本。該細胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細胞功能研究，因為它們表現出組織肥大細胞的許多關鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細胞表面抗原譜的表達 （1,2）。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細胞上表達，在肥大細胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細胞生長失調有關，并與肥大細胞腫瘤和系統性肥大細胞增多癥有關。據報道，HMC-1 細胞系中存在兩個 KIT 激活點突變 。這兩種突變都將受體轉化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態，導致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1（560,816）） 是HMC-1 細胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

 

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

 

細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。 天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

懸浮細胞參考：

大多數懸浮細胞對于環境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細胞密度維持在 1×10 ⁵ 到 1×10 ⁶個/mL（不同細胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 800-1000rpm，離心 5min，棄去上清，補加 1-2mL 培養液后重懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例（ 可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行。大多數血液類相關的懸浮細胞受運輸影響比較大，會出現一批死細胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉移至 T25 瓶中豎著培養，培養基添加 5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補液 3ml 完全培養基后 T25 瓶放倒，等沉淀穩定后觀察細胞密度，持續添加培養基等密度上升足夠傳代為止。

3）細胞凍存:

收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

 

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。