對于免疫檢測試劑盒生產商、診斷試劑廠商和大量使用檢測試劑的藥廠來說,最大的困擾莫過于檢測試劑原料的限制了,隨著抗體對產品全線面市,這一難題迎刃而解。有了優質的抗體對,就能夠制備高效的免疫檢測試劑盒,包括雙抗夾心酶聯免疫檢測,化學發光免疫檢測,酶聯免疫斑點檢測,液態芯片分析系統和免疫層析法等。
下面我們詳細介紹一下云克隆抗體對產品試劑組成,見表一,并以兩種抗體對最常用的應用——雙抗夾心ELISA和免疫層析(膠體金)為例來介紹該類產品的使用方法。
1.雙抗夾心ELISA:
1.1. 酶標板包被抗體流程:
1.1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體,或者設計預實驗用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體,酶標孔中加100ul包被抗體包被。酶標板加上覆膜,4oC溫育過夜或37oC溫育2小時。
1.1.2棄去孔內液體,每孔用350μL的洗滌液洗滌,浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標板來移除孔內所有液體。此過程也可采用噴射瓶,多道移液器 或自動洗板機來完成。
1.1.3每孔加入200ul封閉液封閉,37oC溫育1.5小時。
1.1.4 棄去孔內液體,甩干,洗板1次,方法同步驟1.1.2。酶標板包被抗體完成。
1.2. 實驗流程
1.2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標準品工作液,或設計預實驗設定倍比稀釋的多個標準品工作液。酶標板中依次加入100μL不同濃度的標準品,空白孔加100μL標準品稀釋液,余孔加待測樣品100μL,酶標板加上覆膜,37oC溫育1小時。
1.2.2 棄去孔內液體,甩干,洗板1次,方法同步驟1.1.2。
1.2.3 按說明書推薦的稀釋倍數或使用多個不同稀釋倍數稀釋檢測抗體(生物素標記的單/多克隆抗體),酶標板中每孔加入100μL稀釋后的檢測抗體,酶標板加上覆膜,37oC溫育1小時。
1.2.4 此后實驗方法與常規ELISA實驗同。
2.免疫層析(膠體金):
2.1 膠體金標記抗體的制備。將檢測抗體加入到膠體金溶液中,攪拌均勻,靜置0.5-24小時,逐滴加入牛血清蛋白,攪拌0.5-24h,靜置過夜。離心,棄去上清液。得到膠體金標記抗體。
2.2 噴金。將膠體金標記抗體噴在結合墊上,37oC抽風烘干5-24h,得到噴金后的結合墊。
2.3包被C線。C線即是質控線,用二抗包被。
2.4包被T線。T線是檢測線,用包被抗體包被。37oC抽風烘干2-24h, 得到包被后的硝酸纖維素膜,浸泡在封閉液中,37oC抽風烘干2-24h。
2.5 組裝。將聚氯乙烯底板、樣品墊、步驟2.2所得噴金后的結合墊、步驟2.3&2.4處理好的硝酸纖維素膜和吸水紙組裝,切割成條,得到膠體金免疫層析快速檢測試紙條;