臨床化學檢驗血液標本是指為完成某項或多項臨床化學檢驗項目而采集的一定量的血液,包括抗凝及非抗凝血。而Elisa試劑盒檢測中血液樣本可以是多個種類,比如,人,大鼠,小鼠等動植物。
標本類型
臨床化學檢驗血液標本分為血清、血漿和全血3種。血清和血漿為臨床常用,除前者不含纖維蛋白原外,其余多數化學成分無差異;全血只有在紅細胞內成分與血漿成分相似時才用;血氣分析、血紅蛋白電泳等時用全血,一般臨床化學分析多不用全血。
全血處理為血清或血漿
血液標本采取后應盡可能早地自然地使血清(漿)從與血細胞接觸的全血中分離出來。
一般應于采血后2h內分離出血清或血漿。全血處理為血清或血漿分為離心前、離心中和離心后三個階段,對各不同階段均有具體要求。
(一)離心前階段
即指標本采集到離心處理前的一段時間。
1.血清:標本離心前一般應令其自行凝集,不可用木棍等剝離凝血塊。
通常于室溫(22~25℃)放置30~60min血標本可自發完全凝集;冷藏標本凝集緩慢;加促凝劑時凝集加快(標本采集后應輕輕顛倒混合5~10次,以確保促凝劑作用)。
2.血漿:需用血漿標本時,必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,而且采血后必須立即輕輕顛倒采血管混合5~10次(以確保抗凝劑發揮作用),5~10min后即可分離出血漿。
3.冷藏標本:標本冷藏可抑制細胞代謝,穩定某些溫度依賴性成分但全血標本一般不能冷藏;血鉀測定標本冷藏不得超過2h.血液中兒茶酚胺、pH/血氣、氨、乳酸、丙酮酸、胃泌素、甲狀腺激素等檢測時需用制冷的標本。
標本需要冷藏(2~8℃)時,標本采取后應立即將標本置于冰屑或冰水混合物(不可用大冰塊),并且必須保證標本與制冷物充分接觸,保證制冷物達到標本的高度。
4.代謝抑制劑和防腐劑:某些添加劑加入血液標本中能抑制細胞代謝,可以防止血液標本貯存時分析物濃度的變化。
血液葡萄糖測定時,如在血液中加入氟化鈉,在血細胞未分離的情況下,葡萄糖在22~25℃時可穩定24h,2~8℃時可以穩定48h;但在新生兒和兒童標本,由于紅細胞壓積高,用氟化鈉難以控制細胞的糖酵解作用;甲醛-草酸鉀抗凝保存劑不適合血糖測定;氟化鈉-麝香草酚混合劑因能抑制酶活性,不適用于酶學測定。
5.標本采集現場:(1)標本采集后應盡快送往實驗室,尤其當收集區溫度超過22℃時此點更為重要;(2)血液標本采集后血管必須加塞、管口向上、垂直放置,以減少管中內容物振動,促進凝血完全,防止標本蒸發、污染和外濺等;(3)已收集的血液標本應溫和地處理,要防止標本管振蕩所造成的溶血;溶血可影響測定結果。
有嚴重影響(使結果升高)的項目有:乳酸脫氫酶、血清門冬氨酸氨基轉移酶、血清鉀和血紅蛋白;引起值得注意的影響的項目有:血清鐵(↑)、血清丙氨酸氨基轉移酶(↑)和血清甲狀腺素(↓);輕度受影響(增加)的有:總蛋白、白蛋白、血清磷、血清鎂、血清鈣和酸性磷酸酶;
6.標本運送:全血標本應盡快從采血現場運送至實驗室,如果運送距離較遠,特別是因分析物穩定性有影響,必要時可于采血現場分離出血清或血漿后,再送往實驗室;標本運送過程中要注意標本的包裝、溫度要求、處理方法等,要確保分析成分的穩定性;標本管在運送過程中要保持管口封閉、向上垂直放置。
7.實驗室接受標本及離心標本準備:(1)要有標本收取記錄(應認真核對檢驗中清單,對有關情況要認真記錄,標本接收及處理應簽字登記);
(2)對接受的標本要予以分類準備離心;(3)實驗室接受標本后應仍保持標本管于密閉封口、管口向上,垂直位放置。管塞移去后血中CO2丟失,會造成pH增加,離子鈣和酸性磷酸酶減少,尤其pH變化會影響某些檢測結果的準確性;(4)標本凝集時間要充分;加抗凝劑的血液標本可以立即離心;加促凝劑的標本可于采血后5~15min盡早離心;抗凝的全血標本(鋅、鋰、原卟啉等測定時)可以不離心;(5)冷藏(2~8℃)標本應保持這個溫度直到準備離心。推薦用溫度控制離心機;(6)離心標本前不主張用小木棒或類似器材去剝離附著于試管壁和管塞上的凝塊,人為剝離會誘導溶血。如果必須露出試管壁或取下管塞時,一定要十分注意,動作一定要輕柔。
(二)離心階段
即指標本處于離心機里的一段時間。
1.離心時間和相對離心力(RCF):臨床化學分析血液標本離心時,RCF(1000~1200)xg,離心時間為5~10min.
2.溫度控制離心:離心時產熱不利于分析物穩定,臨床化學分析血液標本離心時必須采用溫度控制離心機。一些溫度依賴性分析物(如促腎上腺皮質激素、環腺苷酸、兒茶酚胺等)應在4℃分離;無特殊溫度要求的分析物,離心溫度應設定在20℃~22℃;溫度低于15℃可以人為地使血鉀測定值增高;冷藏運送的標本必須在要求的溫度下離心。
3.關于再離心:標本離心最好一次完成,若需再次離心,應距上次離心相隔時間很短;對于含有分離物質的血標本絕不可以再離心。
(三)離心后階段
指標本離心后和用于檢測的血清或血漿被取出一定量之前的一段時間。
1.血清或血漿與接觸的血細胞和凝塊的分離應在采血后盡快(2h內)完成。
2.分離的血清或血漿的貯存:實驗室的室溫和血清或血漿的貯存溫度、時間,是分析物穩定性和測定結果準確性的重要參數。
(1)于22℃~25℃血清或血漿的保存不超過8h;
(2)實驗于8h內不能完成時,血清或血漿應置2℃~8℃保存;
(3)48h內不能完成的實驗項目,或分離的血清或血漿需貯存48h以上時,應于-20℃保存;
(4)標本不可反復凍融(只能凍融一次),且不可貯存于無霜冰箱(可造成樣品溫度變化);
(5)離心后分離凝膠(凝膠屏障)上面的血清可保存2~5天(亦有報道4℃可貯存24h),但必須保證凝膠的完整性;但應用非凝膠分離物質時,離心后必須立即將血清或血漿移出。
(6)血清或血漿必須保存于密閉的試管中。
ELISA實驗中血清的采集、處理和保存;
1、 真空采血針采集2ml新鮮血液,加入無菌試管中;
2、 采血后室溫靜置1小時;
3、 將采集血液用離心機4℃,2500rpm離心10min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
4、 取上清。 分裝凍存備用,
2-8℃下,可放置保存24-48小時;
-20℃下,可放置保存1個月;
-70℃下,可放置保存6個月;
5、 根據你的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。
大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的 ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染,因為菌體中可能含有含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。