細胞生物學
我司為廣大客戶提供基于細胞培養相關技術服務，為確保您的項目進展順利，我們一律采用GIBCO品牌原裝進口試劑(血清和培養基等)。服務項目包括細胞培養、細胞模型建立、細胞轉染、穩定細胞系建立、細胞增殖/抑制、細胞周期、細胞凋亡檢測等。
細胞轉染，穩定細胞系建立及細胞模型
服務內容
一、細胞轉染和穩定表達細胞株篩選
通過轉染試劑或電穿孔方式等方式，將目的基因導入靶細胞24-48小時后，目的基因即在細胞內表達。此時為了建立穩定細胞系，可根據不同基因載體中所含的抗性標記，選用相應的藥物對靶細胞進行篩選，從而得到穩定表達外源基因的細胞克隆。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）。
二、針對不同種類細胞使用藥物，低氧，壓力等外源因素進行刺激等處理，建立相關的細胞模型，從而進行后續的研究工作。
服務特點
1、針對不同細胞系篩選合適的轉染試劑和質粒濃度配比，提高轉染效率和蛋白表達量
2、豐富的抗生素篩選經驗和單細胞克隆鑒定方法提高實驗效率
3、構建的穩定表達細胞株可穩定傳代，極少發生性狀丟失
收費標準
收費標準￥ | 項目周期（工作日） | |
質粒提取和蛋白表達檢測 | ||
質粒小量提取 | 50/質粒 | 3 |
去內毒素質粒大提 | 600/質粒 | 3 |
單質粒細胞轉染 | 1000/質粒 | 3 |
蛋白表達檢測（WB） | 800/蛋白 | 5-10 |
熒光顯微鏡觀察蛋白表達 | 600/蛋白 | 3 |
雙質粒共轉染 | 2500/對 | 5 |
多質粒共轉染 | 請詢價 | — |
基因表達敲低 | ||
siRNA的設計與合成 | 2000/基因 | 5-10 |
shRNA載體構建 | 5000/基因 | 15 |
去內毒素質粒大提 | 600/質粒 | 3 |
細胞轉染 | 1000/基因 | 3 |
熒光定量PCR檢測核酸水平敲低 | 600/基因 | 5 |
Western Blot檢測蛋白表達 | 800/蛋白 | 5-10 |
基因穩定表達細胞株篩選 | ||
表達載體構建 | 請參見載體構建目錄 | 15 |
去內毒素質粒大提 | 600/質粒 | 3 |
細胞轉染，流式分選和抗生素篩選 | 20000/細胞系 | 40 |
Western Blot檢測穩定細胞株蛋白表達 | 800/蛋白 | 5-10 |
基因穩定敲低細胞系篩選 | ||
siRNA的設計與合成 | 2000/基因 | 5-10 |
shRNA載體構建 | 5000/基因 | 15 |
去內毒素質粒大提 | 600/質粒 | 3 |
細胞轉染，流式分選和抗生素篩選 | 25000/細胞系 | 40 |
Western Blot檢測穩定細胞株蛋白表達 | 800/蛋白 | 5-10 |
病毒包裝 | ||
包裝質粒構建 | 2500/基因（<3000 bp） | 15 |
慢病毒包裝系統 | 8000/107 | 15-20 |
腺病毒包裝系統 | 8000/107 | 15-20 |
逆轉錄病毒包裝系統 | 8000/107 | 15-20 |
蛋白表達檢測（Western Blot 或ELISA） | 800/目的蛋白/膜；500/板 | 5-10 |
客戶提供
1、待克隆基因和載體信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如無相關shRNA序列信息，本公司可代為設計并收取相關費用）；
2、待轉染細胞株（如需使用常用腫瘤細胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、陽性對照樣品（盡量提供）
4、相關文獻（可選）
公司交付
1、細胞轉染效率評價結果（GFP熒光表達）
2、WB檢測蛋白表達結果
3、敲低表達shRNA相關載體和菌液
4、穩定敲低細胞株或過表達細胞株
5、實驗報告
細胞生物學特性和功能學檢測
服務內容
一、細胞生長，增殖/抑制曲線
不同種類的細胞具有不同的生長速率，同一株細胞在不同的培養條件和處理下其生長速率也會發生很大改變。細胞的生長速率是反應細胞狀態和外界刺激對細胞影響的一個重要指標。使用MTT和CCK-8方法對不同時間點和處理條件下活細胞進行檢測，根據OD值判斷細胞密度及生長速率。
二、克隆形成實驗
與細胞生長曲線實驗類似。細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量，反應的是具有貼壁和有增殖活力的細胞數目。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。是檢測細胞在正常和外界刺激條件下形成克隆的能力，間接反應細胞狀態的好壞和外界處理的作用。
三、細胞遷移和侵襲實驗
活體細胞通常都具有一定的遷移能力，不同細胞的遷移能力不同。與遷移相類似的能力是侵襲，具有裂解細胞基質的能力的細胞通常具有較強的侵襲能力。大部分腫瘤細胞的遷移能力較強，這也是反應腫瘤細胞體內發生轉移的一個重要指標。研究中通常會先對細胞的遷移能力進行檢測，再進一步觀察該細胞是否具有侵襲能力。在進行遷移和侵襲實驗過程中，我們會選擇多種方法在不同的時間點進行檢測。綜合判斷某種細胞的遷移和侵襲能力。
四、細胞周期和凋亡檢測
細胞周期指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束為止的全過程，可分為間期與分裂期兩個階段。在這一過程中，細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。當細胞完成有限的分裂之后會逐漸衰老死亡，這一過程被稱為凋亡。不同的蛋白或者藥物等會對細胞周期產生一定的影響，進一步影響細胞增殖速率。凋亡作為一種細胞常見的死亡方式易受到外界環境和刺激的影響，隨著細胞內Caspase的激活，凋亡通路發生活化，進一步誘導細胞凋亡的發生。目前有多種方法可以檢測細胞凋亡，如Tunel，Annexin V+PI雙染色等，也可以通過檢測凋亡相關蛋白的表達反應細胞凋亡情況。
收費標準和服務周期
服務項目 | 收費標準￥ | 項目周期（工作日） |
細胞生長曲線 | ||
MTT或MTS | 1000/板 | 3-5 |
CCK8 | 1000/板 | 3-5 |
常規培養 | 800/株 | 7-10(因細胞而異) |
藥物處理 | 1500/株(5個藥物濃度) | 10-15 |
蛋白過表達 | 2500/株 | 10-15 |
蛋白敲低 | 3000/株 | 10-15 |
特殊培養條件 | 咨詢定價 | — |
細胞遷移和侵襲 | ||
細胞劃痕法 | 1500/細胞 | 7-10 |
遷移Transwell法 | 2500/細胞 | 7-10 |
侵襲Transwell法 | 3000/細胞 | 7-10 |
熒光定量PCR法 （檢測MMP9等遷移侵襲相關基因表達） | 2500/細胞 | 10 |
克隆形成實驗 | ||
常規培養 | 800/株 | 7-10(因細胞而異) |
藥物處理 | 1500/株(5個藥物濃度) | 10-15 |
蛋白過表達 | 2500/株 | 10-15 |
蛋白敲低 | 3000/株 | 10-15 |
特殊培養條件 | 咨詢定價 | — |
細胞周期檢測 | ||
流式法 | 100/樣品 | 5 |
細胞凋亡檢測 | ||
流式法（Annexin V+PI） | 150/樣品 | 7 |
Tunel法 | 200/樣品 | 10-15 |
DNA凝膠電泳 | 200/樣品 | 5 |
ELISA檢測核小體 | 1500/板 | 5 |
WB檢測凋亡相關蛋白表達 | 800/蛋白 | 10 |
細胞模型建立 | ||
藥物或化合物處理細胞模型建立 | 詢價 | 15-20 |
蛋白過表達細胞模型建立 | 詢價 | 15-20 |
蛋白敲低細胞模型建立 | 詢價 | 1-2周 |
基因敲除細胞模型建立 | 詳見Cas9系統 | — |
其它細胞模型建立 | 詢價 | — |
客戶提供
1. 待檢測細胞系
2. 目的基因名稱和信息（NCBI號）
3. 待轉染質粒或菌株
4. 目的蛋白一抗
公司交付
1. 實驗數據和圖片（如流式結果圖，WB圖等）
2. 完整實驗報告
