OTUB1基因的siRNA轉(zhuǎn)染對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及STAT3信號通路的影響研究

探討卵巢腫瘤相關(guān)蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA轉(zhuǎn)染對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活力、凋亡及STAT3信號通路的影響。方法 Western blotting檢測OTUB1在人腦惡性膠質(zhì)瘤U251、U87、BT325和M17細(xì)胞中的蛋白表達(dá);U87細(xì)胞分為空白組(不做任何處理)、NC組(轉(zhuǎn)染Control siRNA)和si-OTUB1組(轉(zhuǎn)染OTUB1 siRNA),參照Lip2000轉(zhuǎn)染試劑盒說明轉(zhuǎn)染siRNA。Western blotting檢測轉(zhuǎn)染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表達(dá),并選擇抑制效果好的siRNA作為研究對象;MTT檢測OTUB1-siRNA轉(zhuǎn)染后的24~72 h細(xì)胞活力;流式細(xì)胞儀檢測OTUB1-siRNA轉(zhuǎn)染的48 h細(xì)胞凋亡率;Western blotting檢測STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信號通路下游相關(guān)基因cyclin D1和Bcl-2的蛋白表達(dá)。結(jié)果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17細(xì)胞中均呈現(xiàn)出陽性表達(dá),在U87細(xì)胞中呈現(xiàn)出較高水平表達(dá);OTUB1-siRNA轉(zhuǎn)染后的U87細(xì)胞OTUB1的蛋白表達(dá)顯著低于空白組和NC組(P<0.05);與NC組比較,si-OTUB1轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞24-72h的細(xì)胞活力均顯著降低,轉(zhuǎn)染48 h的細(xì)胞凋亡率顯著升高,p-STAT3、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05),而三組間STAT3的蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 OTUB1在人腦惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞高表達(dá),抑制OTUB1表達(dá)后可明顯降低腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活力,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,機(jī)制可能是通過下調(diào)STAT3信號通路實現(xiàn)的。