酪酰胺信號放大技術(TSA,Tyramide signal amplification)又稱為催化信號放大技術(CSA,catalyzedsignal amplification),其從產生到現在已有近二十年的發展時間,目前應用較為廣泛。TSA技術是一類利用HRP對靶抗原進行高密度原位標記的酶學檢測方法,其不但可以用于IF/IHC的信號放大,亦可用于Elisa、ISH等檢測。可與高性能染料Alexa Fluor、傳統熒光染料、酶系統和比色檢測系統相兼容,本帖主要討論一下其在IHC/IF中的應用。
原理
TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結合位點),產生大量的酶促產物,該產物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結合,這樣在抗原-抗體結合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的Streptavidin—HRP/熒光基團結合,經幾次這樣的循環放大,可以結合大量的酶分子or熒光基團,結果使其檢測信號得到幾何級放大。
應用
1、TSA技術可以用于檢測用傳統方法無法檢出的低豐度靶標。基于酪酰胺的信號放大技術能夠提供極強的敏感度、檢測極微量的目的抗原。
2、極大的降低抗體的用量,節約抗體,實測確實可以顯著提升抗體的稀釋比例。有廠家宣稱在保證結果下可以降低抗體的1000倍的使用量。
3、簡單的孵育步驟對樣本進行處理,即可獲得樣本的多色標記信號,對于不同類型抗原進行檢測,如核酸及蛋白的同時標記檢測;同時,該技術可與其他信號放大系統或傳統標記方法聯合使用。
4、同一來源種屬抗體的多重標記免疫組化實驗,利用檢測試劑的敏感性差異可以完成多重熒光標記。
缺點
1、對于非特異性信號無法去除,隨信號增強而升高,實測確實如此,具有一定的非特異性擴增。
2、目前市售的試劑盒價格價格較高,除非特殊情況,一般很少研究人員愿意嘗試。