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ELISAS試驗抗原的吸取

發表時間:2017-09-05

ELISAS試驗抗原的吸取

任何血清學試驗都依賴于具有高效價、特異性強的抗血清的發作,而抗血清的制備離不開抗原的搜集、保存和獲取。采回的害蟲饑餓24h后,將等體積的磷酸緩沖液(PBS)滴入備用的害蟲中,研磨后參與過量的PBS(PH=7.4),在4℃下攪拌24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,別離上清液。沉渣用上法重復抽提一次。

 

將兩次所得的上清液混合后,置于4℃下更換多次冷鹽水透析24h或48h。透析液用冰凍單調法或反透析法進行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計測定蛋白質含量,得到恰當濃度的蛋白質溶液即位抗原。

 

抽提過程中應留意:①一切的處理都需在低溫(4℃)下進行,以防蛋白質變性:②若抗原溶液需保存較長的時間,則需加防腐劑(如NaN3)或在凍干狀態下保存:③為制備特異性強的抗血清,抗原可用規范的生化技能進行純化:④如一次不能搜集滿足的抗原,可將每次的蟲體保存在-20℃或將抗原凍干直到堆集滿足的量。


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