胃蛋白酶測試方法
胃蛋白酶(英文名稱:Pepsin)是一種消化性蛋白酶,由胃部中的胃粘膜主細胞(gastricchiefcell)所分泌,功能是將食物中的蛋白質分解為小的肽片段。胃蛋白酶的前體被稱為胃蛋白酶原。胃腺主細胞分泌的蛋白酶。初分泌時為無活性的胃蛋白酶原,在胃酸或已激活的胃蛋白酶的作用下轉變為具活性的胃蛋白酶。
測試方法:
取試管6支,其中3支各精密加入對照品溶液1ml,另3支各精密加入供試品溶液1ml,置37℃±0.5℃水浴中,保溫5分鐘,精密加入預熱至37℃±0.5℃的血紅蛋白試液5ml,搖勻,并準確計時,在37℃±0.5℃水浴中反應10分鐘。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,搖勻,濾過,取續濾液備用。
另取試管2支,各精密加入血紅蛋白試液5ml,置37℃±0.5℃水浴中保濕10分鐘, 胃蛋白酶再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,其中1支加供試品溶液1ml,另1支加上述鹽酸溶液1ml,搖勻,濾過,取續濾液,分別作為供試品和對照品的空白對照,照分光光度法在275nm的波長處測定吸收度,算出平均值AS和A,按下式計算。
A×Ws×n 每1g含蛋白酶活力(單位)=As×W×10×181.19式中 AS為對照品的平均吸收度;A為供試品的平均吸收度;Ws為對照品溶液每1ml中含酪氨酸的量,μg;W為供試品取樣量,g;n為供試品稀釋倍數。在上述條件下,每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,為一個蛋白酶活力單位。