幾種檢測支原體是否污染的方法
分離培養法:
分離培養法是支原體檢測的金標方法,其檢測精確度最高。這種方法是從可疑的細胞培養體系中取樣,并接種到最適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體,它們就會在這種瓊脂平板上瘋狂生長,最終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養法也存在兩個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類,分離培養法也有力所不及的時候。
如果你實在不想等這么久,或者希望在分離培養法的等待過程中先拿到初步結果,你可以試一試DNA、PCR或酶學檢測方法。不過需要注意的是,上述檢測方法都不能單獨檢出所有類型的支原體,而且靈敏度也沒有分離培養法高,所以最好結合使用兩種方法以獲得最可靠的檢測結果。
PCR法:
PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株,PCR法檢測支原體只需幾個小時,是最快但也是最不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中,支原體DNA會顯示為特異性條帶,以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數支原體,但謹慎起見最好同時使用另一種檢測方法來進行驗證。
酶學檢測和ELISA:
此外,也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP,隨后能利用ATP發光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體,來檢測培養物中是否含有支原體。